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HTI 凝血因子Xa

發(fā)布時(shí)間:2018/11/15      點(diǎn)擊次數(shù):3385

 

HTI 凝血因子Xa

haemtech Coagulation Factor Xa

 

 

 

因子Xa在凝血酶原
酶中的參與說明了絲氨酸蛋白酶因子Xa在凝血酶原酶復(fù)合物中的參與。膜結(jié)合因子Xa與膜結(jié)合因子Va結(jié)合以形成凝血酶原酶復(fù)合物。該復(fù)合物通過蛋白水解除去凝血酶原的片段1.2(F1.2)部分,有效地將酶原凝血酶原(II)轉(zhuǎn)化為活性絲氨酸蛋白酶凝血酶(IIa)。

 

 

 

 

HCXA-0060

尺寸

100微克,1毫克

公式

50%甘油/水(v / v)

 

 

存儲(chǔ)

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

HCBXA-0061 

尺寸

100微克

公式

50%甘油/水(v / v)

 

 

存儲(chǔ)

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

HCXA-GD Human gla-Domainless Factor Xa

 

 

尺寸

100微克

公式

10mM Hepes,50mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

HCXA-EGR

尺寸

100微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

 

 

HCXA-DEGR 

 

 

尺寸

100微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

HCXA-BEGR

 

 

尺寸

100微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

BCXA-1060

尺寸

100微克

公式

50%甘油/水(v / v)

 

 

存儲(chǔ)

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

BCXA-EGR 

尺寸

100微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

 BCXA-DEGR

尺寸

100微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

 

 

存儲(chǔ)

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

 

 

MCXA-5060 鼠標(biāo)因子Xa

 

 

尺寸

50微克

公式

50%甘油/水(v / v)

 

 

存儲(chǔ)

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

 

 

活動(dòng)決定

因子X凝固測定或顯色測定

保質(zhì)期(妥善保存)

12個(gè)月

 

 

 

 

通過內(nèi)在或外在因子Xase復(fù)合物激活酶原因子X產(chǎn)生活性絲氨酸蛋白酶因子Xa(1,2)。因子X的活化需要重鏈的蛋白水解切割,導(dǎo)致活化糖肽的釋放。因子Xa中的重鏈區(qū)含有絲氨酸蛋白酶催化結(jié)構(gòu)域,而如酶原中的輕鏈含有膜結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

因子Xa參與凝血酶原酶復(fù)合物,其催化凝血酶原快速轉(zhuǎn)化為凝血酶。凝血酶原酶是由在血漿存在下組裝在細(xì)胞表面上的因子Xa(酶)和因子Va(輔因子)組成的酶復(fù)合物。盡管因子Xa可以獨(dú)立地催化凝血酶原的活化,但是在*組裝凝血酶原酶復(fù)合物的情況下,該反應(yīng)發(fā)生的速率增加了近300,000倍。在解體凝血酶原酶復(fù)合物后,通過輔因子的失活,因子Va或通過抑制劑如ATIII直接抑制因子Xa來終止因子Xa在體內(nèi)的凝固活性。

近年來,分子生物學(xué)家利用因子Xa對細(xì)菌中表達(dá)的融合蛋白進(jìn)行位點(diǎn)特異性切割(9-12)。將Xa因子敏感位點(diǎn)摻入目標(biāo)重組蛋白和促進(jìn)純化和/或表達(dá)的肽或蛋白質(zhì)之間。通過用因子Xa切割,從表達(dá)的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過親和層析容易地除去因子Xa。

因子Xa通過用從羅素的毒蛇毒液中分離的因子X活化劑活化純化的因子X來制備。通過在苯甲脒 - 瓊脂糖上的色譜法從活化混合物中純化因子Xa,然后進(jìn)行凝膠過濾(1,3)。還可獲得幾種因子Xa的修飾形式,包括:A)含有三肽氯甲基酮抑制劑EGRck或熒光抑制劑Dansyl-EGRck的活性位點(diǎn)阻斷因子Xa; 和B)人Gla-domainlessβ-因子Xa。該酶以50%(體積/體積)甘油/ H2O供應(yīng),應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃。通過SDS-PAGE分析測定純度,并在因子Xa凝固測定和/或顯色底物測定中測量活性。

除了其在凝血研究中的廣泛應(yīng)用之外,因子Xa還可用于融合蛋白的位點(diǎn)特異性切割。將因子Xa敏感位點(diǎn)摻入目的重組蛋白和促進(jìn)純化和/或表達(dá)的肽或蛋白質(zhì)之間。通過用因子Xa切割,從表達(dá)的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過親和層析容易地除去因子Xa。批次一致性確保每次都可重現(xiàn)的結(jié)果。對于涉及細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn),請與我們聯(lián)系,討論用于細(xì)胞培養(yǎng)的定制低內(nèi)毒素批次。

 

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人因子Xa,每泳道1μg

緩沖

MOPS

標(biāo)準(zhǔn)

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),BSA(64 kDa),谷氨酸脫氫酶(51 kDa),酒精脫氫酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(19 kDa),溶菌酶(14 kDa的)

特別說明

由于存在高達(dá)50%的β形式,重鏈?zhǔn)请p重鏈。α-Xa向β-Xa的轉(zhuǎn)化通過α-Xa對α-Xa的自動(dòng)切割發(fā)生,導(dǎo)致COOH末端肽的喪失。

 

 

 

 

本土化

等離子體

行動(dòng)方式

凝血酶原酶復(fù)合物的酶組分

分子量

46,000(人類)(4)
45,300(牛)(5)

消光系數(shù)

Ë

1%

1厘米,280納米

 

 

= 11.6(人類)(9)

 

 

= 12.4(牛)(7)

 

 

具體活動(dòng)

約1000單位/毫克

結(jié)構(gòu)體

兩個(gè)亞基,Mr = 16,200和29,000(人)(6),Mr = 16,500和28,800(牛)(5),NH2末端gla結(jié)構(gòu)域,兩個(gè)EGF結(jié)構(gòu)域

碳水化合物百分比

3.0%(人類)(8)
2.1%(牛)(8)

翻譯后修改

11個(gè)gla殘基,
一個(gè)β-羥基天冬氨酸

參考

1. Jesty,J.,et al。,Methods Enzymol。,45,95(1976)。

2. 杰克遜,CM,安。Rev.Biochem。,49,765(1980)。

3. Krishnaswamy,S.,et al。,J.Biol。Chem。,262,3291(1987)。

4. Discipio,RG等,Biochemistry,16,5253(1977)。

5. Fujikawa,K。和Davie,EW,Methods Enzymol。,45,89(1976)。

6. Krishnaswamy,S.,et al。,J.Biol。Chem。,261,8997(1986)。

7. Discipio,RG等,Biochemistry,16,698(1977)。

8. Jackson,CM等,Biochemistry,7,4506(1968)。

9. Fujikawa,K.,Biochemistry,13,5290(1974)。

10. Nagai,K。,et al。,Proc。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。USA,82,7252(1985)。

11. Aurell,L.,et al。,Thromb。Res。,11,595(1984)。

12. Nagai,K。和Thogersen,H.,Nature,309,810(1984)。

樣本出版物

1. Monteiro,S.,Biochem。J.(2005)387,871-877。(凝血酶原激活)

2. Zhang,D.,et al。,Biochemistry。2006年11月28日; 45(47):14175-14182。(凝血酶原激活)

3. K. Garai等人。/ Protein Expression and Purification 66(2009)107-112(融合蛋白的切割)

4. Kamata,K。,et al。,Proc。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國,卷。95,pp.6630-6635,1998年6月(結(jié)晶)

5. Yang,Y。等,J Immunol。2006年12月1日; 177(11):8219-8225。(用作ELISA中的捕獲)

6. Krisinger。,等,Journal Biol Chem。(2009)VOL。284,沒有。9,pp.5896-5904(表面等離子體共振分析)

 

 

 

 

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